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東莞PCR實(shí)驗(yàn)室
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東莞市銘科實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司
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PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室,。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱(chēng),。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段,，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制,。用于基因檢測(cè)，具有高度敏感性,、特異性,、快速、簡(jiǎn)單等特點(diǎn),，能將傳統(tǒng)方法難以檢測(cè)的極少數(shù)病毒DNA片段擴(kuò)增百萬(wàn)倍以上,，從而大大提高疾病的診斷水平。它不僅可用于基因分離,、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,，還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．又稱(chēng)無(wú)細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。
PCR實(shí)驗(yàn)室平面規(guī)劃圖：
PCR實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求：
標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)劃：
1 、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
PCR擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為三個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),、標(biāo)本制備區(qū),、擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)行,。
2,、實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化等級(jí)要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,，宜采用全送全排的氣流組織形式,。同時(shí)，要嚴(yán)格控制送,、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求,。
2.1試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑,。
對(duì)與氣流壓力的控制，本區(qū)應(yīng)對(duì)外界保持微正壓,。
2.2標(biāo)本制備區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存,、核酸(RNA、DNA)提取,、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成,。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,。另外,，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng),。
2.3擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。此外,，已制備的DNA模板 (來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行,。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。為避免氣溶膠所致的污染,，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
3,、污染的預(yù)防與控制
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免污染,。在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染,；天然基因組DNA的污染,；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,，實(shí)驗(yàn)就必須停止,，直到找到污染源為止，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢,，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。所以發(fā)生污染后再?lài)@實(shí)驗(yàn)室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，浪費(fèi)人力物力,。因此要避免污染,，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除,。
3.1工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分
（1）各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)置合理,；
（2）各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門(mén)牌或不同的地面顏色等），以避免各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品,、試劑等發(fā)生混淆,。
3.2合理的系統(tǒng)設(shè)置
（1）合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng),；
（2）嚴(yán)格的氣流壓力控制,，保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
3.3 規(guī)范的操作
（1）擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn),，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作,；
（2）在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套,，并經(jīng)常更換,。此外，操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施,；
（3）清潔工作及時(shí),、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后,，必須立即對(duì)本區(qū)進(jìn)行清潔,。除常規(guī)的消毒液體對(duì)表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線(xiàn)燈的照射消毒外，對(duì)一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理,。
3.4嚴(yán)格的管理
（1）嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員,。與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室,，有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門(mén)；
（2）盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性,。
（3）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,，廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉,，用過(guò)的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,，如焚燒等；
（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù),。
3.5完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,，如超凈工作臺(tái),、離心機(jī)、加樣器等,。
疾控中心PCR 實(shí)驗(yàn)室基本要求:
1,、 PCR 實(shí)驗(yàn)室依據(jù)所使用的方法可分為試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備,、擴(kuò)增,、產(chǎn)物分析等三或四個(gè)區(qū)域。只是使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀,、HIV病毒載量測(cè)定儀的PCR實(shí)驗(yàn)室,，有上述前面三個(gè)區(qū)域即可。各區(qū)域應(yīng)完全獨(dú)立分隔,，不應(yīng)有任何的空氣直通,。
2 、 產(chǎn)物分析區(qū)或三個(gè)區(qū)域的最后一個(gè)區(qū)域（即擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）,，空氣流向應(yīng)由室外向室內(nèi),，可通過(guò)在室內(nèi)設(shè)置通風(fēng)櫥、排風(fēng)扇或其他排風(fēng)系統(tǒng)達(dá)到空氣流由室外向室內(nèi)流動(dòng)的要求,。
3 ,、PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域儀器設(shè)備配備通常如下：
3.1、 試劑準(zhǔn)備區(qū)
儀器設(shè)備主要應(yīng)有加樣器,、冰箱,、天平、低速離心機(jī),、混勻器,、可移動(dòng)紫外燈等�,？墒褂贸瑑艄ぷ髋_(tái)作為試劑配制操作臺(tái)面,。
3.2、標(biāo)本制備區(qū)
儀器設(shè)備主要應(yīng)有生物安全柜（最好為B2, 可避免提取核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán),，造成標(biāo)本間交叉“污染”,，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。此外還應(yīng)配備加樣器,、臺(tái)式高速離心機(jī)（冷凍及常溫）,、臺(tái)式低速離心機(jī)、恒溫設(shè)備（水浴和/或干浴儀）,、冰箱,、混勻器和可移動(dòng)紫外燈等。
3.3,、 擴(kuò)增區(qū)
主要儀器就是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀（PCR儀,，實(shí)時(shí)熒光或普通的）。熱循環(huán)儀的電源應(yīng)專(zhuān)用,，并配備一個(gè)穩(wěn)壓電源或UPS,，以防止由于電壓的波動(dòng)對(duì)擴(kuò)增測(cè)定的影響。此外,，根據(jù)工作需要,，還可配備加樣器、超凈臺(tái)等,。
3.4 產(chǎn)物分析區(qū)：
本區(qū)所使用的儀器設(shè)備可能有加樣器,、電泳儀（槽）、電轉(zhuǎn)印儀,、雜交爐或雜交箱,、水浴箱、DNA測(cè)序儀,、酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等,。
